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激光共聚焦显微镜制备样品时玻璃片如何处理
来源: | 发布日期:2022-07-21 17:28:17
 
随着检测设备的提升、各种显微技术的发展和标记手段的提高,如激光共聚焦显微镜在生物学研究中的广泛应用,使得研究者能够迅速、准确地观察到蛋白质在细胞内的表达情况和定位。
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  通过显微镜观察荧光标记细胞内的蛋白质和分子,为生物学的研究提供了更直观的观测手段。因此免疫荧光样品的制备也成为生物学研究中的基本技术方法。
  
  鉴于生物体内的复杂多样性,制备免疫荧光样品的方法也存在一些差异。本文主要介绍构建绿色荧光融合蛋白表达载体,并在培养细胞中表达绿色荧光融合蛋白及免疫荧光样品的制备过程。
  
  将构建好的荧光表达载体进行大量扩增,并通过质粒抽提试剂盒大量纯化,得到不含有内毒素的纯化质粒。将表达载体导入到培养细胞中后,经过培养即可进行荧光蛋白的检测。而将基因导入哺乳动物培养细胞的方法有很多种,生化转染法是很常用的导入培养细胞方法。
  
  为了方便在激光共聚焦显微镜上观察,免疫荧光样品通常需要制备在载玻片上。培养的细胞需要在盖玻片上贴壁生长。盖玻片的厚度应小于0.17mm。购买到的盖玻片需要用玻璃洗液浸泡处理一天以上,再用去离子水冲洗掉残存的洗液。
  
  盖玻片经过高温灭菌处理后,放置在细胞培养皿中,用于培养细胞。对于贴壁不牢的细胞,或者与细胞外基质相关的研究,玻璃片需预先包被细胞外基质,如poly-L-Lysine,Fibronectin,Laminin等。


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